IAA研究NMT标准化方案
IAA研究NMT标准化方案
一、视频资源
二、参考文献
三、常测哪些指标
H+、IAA
四、检测这些离子流、分子流，有什么生物学意义
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2）科研案例
案例1
为了探究JA影响根系生长的生理和分子机制，利用NMT技术研究了拟南芥Col-0、coi1-1突变体根尖区域生长素和质子流速的影响。Col-0植物根部IAA外排流速的峰值出现在根尖300 μm处,在伸长区和成熟区IAA内流。coi1-1的 IAA流速与Col-0幼苗相似。外源50 μm MeJA处理Col-0和coi1-1的幼苗根系时，过渡区IAA外排速率明显受到抑制，而在伸长区和成熟区IAA流速没有显著差异。相反，在coi1-1幼苗根上，MeJA处理对 IAA流速没有影响。为了探讨IAA流速是否与PM H+-ATPase有关，进一步监测了钒酸盐预处理Col-0根系的 IAA流速, 发现IAA外排沿着这些根增加，最显著的区域是分生区和过渡区。幼苗根系的跨膜H+流速与IAA相反,在分生区和过渡区H+内流。然而，在伸长区和成熟区，H+外排。钒酸盐处理增加了Col-0根分生区和过渡区的H+内流。coi1-1根的H+流速与Col-0相似。外源MeJA显著增加H+分泌，最显著的区域是过渡区。外源MeJA对coi1-1根系的净H+流速没有显著影响。结合基因表达水平等实验结果,表明JA信号可能通过调节关键基因的表达来调节生长素信号通路。
Yan S et al. MeJA Affects Root Growth by Modulation of Transmembrane Auxin Flux in the Transition Zone. Journal of Plant Growth Regulation, 2016, 35(1):256-265.
案例2
为了研究虫害后植物生长速率降低的潜在机制，使用小菜蛾取食拟南芥叶片，利用NMT技术研究小菜蛾取食拟南芥叶片后根尖IAA和Ｈ+流速。结果显示，在靠近根系表面过渡区的地方，净IAA流速在虫害后降低（Fig.3）。相反，昆虫取食引起了根表面H+净流速的增加，其中最显著的反应发生在过渡区（Fig.4）。结果结果表明，虫害后植物的的生长减少可能与生长素流速和质子分泌减少有关。
Yan S et al. Insect Herbivory of Leaves Affects the Auxin Flux Along Root Apices in Arabidopsis thaliana. Journal of Plant Growth Regulation, 2017.）
五、可以检测哪些样品
1、动物样品
1）细胞
神经细胞、肿瘤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等
2）组织器官
肿瘤、皮肤、胃粘膜、胰岛、脑（海马体等）、胚胎（大鼠、鱼）、斑马鱼皮肤/鳃、耳蜗、心脏（香螺）、卵（鱼、鸡蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉组织（肌纤维、心肌）
3）其它动物样品
珊瑚、螨虫、昆虫（果蝇幼虫的肠、蟑螂血脑屏障、按蚊、长红锥蝽）、蝌蚪、水蛭、蓝蟹（微感毛）、变形虫、水丝蚓
2、植物样品
1）营养器官
茎：边材、心材、微管形成层、木质部
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮细胞、花粉
种子：整体、胚
果实：果壳、果皮、果肉（苹果、柑橘）、籽粒、棉花纤维、棉桃
3）细胞：植物悬浮细胞、液泡
4）愈伤组织
3、微生物样品
酵母细胞、菌丝、菌落、微藻、细菌（大肠杆菌）
4、其它生物样品
周丛生物
5、非生物样品
金属、混凝土、泥沙、纳米材料、生物医药材料
六、样品需要做哪些前处理
国际领先的非损伤微测技术最大的特点就是活体、无损检测，因此动植物材料在检测前，不需要任何的液氮速冻、染色、研磨处理等。
1、动物单细胞
因NMT是活体检测，故从培养箱中拿出来后，置于培养皿中，直接检测即可。
2、动物组织
因NMT是活体检测，无需提前处理。如检测部位天然暴露在外，如斑马鱼皮肤离子细胞、侧线毛细胞，直接检测即可。如检测部位位于体内，需在检测时暴露出检测部位（可采用麻醉的方式），后检测即可。
3、植物根茎叶等组织器官
天然暴露在外的组织器官，例如根、茎、叶的表面，无需任何处理，直接检测即可。水培、土培、砂培、平板培养均可。
4、植物原生质体/液泡
因NMT是基于微传感器/探针的非损伤检测，检测时不接触样品，故原生质体、液泡需要从组织或者细胞中，提取出来后检测。
5、植物叶片的表皮细胞、叶肉细胞、盐腺细胞、保卫细胞
无需提前处理。因这些细胞处于组织内部，故检测时采用撕取等方式，暴露出相应细胞即可。
6、植物花粉管
离体萌发：在培养皿中萌发一段时间后即可直接检测；在体萌发：将柱头置于培养皿中，待萌发一段时间后即可直接检测。
7、植物果实
无需提前处理。如待测部位位于果实内部，需在检测前暴露出相应部位即可。
8、植物悬浮细胞
无需提前处理。检测时，置于培养皿中检测即可。
七、有哪些检测方式？
即瞬时处理，是指在检测过程中，在正常测试液中瞬间加入所需的干旱胁迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的处理方法，目的是为了观察瞬间干旱胁迫下，样品短时间内的离子/分子的变化趋势，即短时效应。
2、预处理/提前处理好后检测
是指在干旱胁迫一段较长的时间后（数十分钟/数小时/数天），观察植物离子/分子进出的情况，即长时效应。
八、检测环境是空气还是溶液
检测时，只要求待测部位浸于溶液中（无需整体都浸在溶液里）。
九、样品是如何检测的
十、可以送样检测吗
可以送样检测。目前非损伤微测技术测试服务由中关村NMT产业联盟统筹管理，由遍布全国的25家NMT创新平台服务中心，提供检测服务。点击获取测试服务
