斑马鱼NMT标准化方案
斑马鱼NMT标准化方案
一、视频资源
二、参考文献
三、常测哪些指标
H+、NH4+、Ca2+、Na+、K+
四、检测这些离子流、分子流，有什么生物学意义
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2）科研案例
本研究以斑马鱼胚胎为模式物种，评估顺铂的亚致死浓度剂量对斑马鱼胚胎的影响。利用 NMT 技术，我们侦测毛细胞的钙离子流以及离子细胞的氢离子流变化来评估毛细胞和离子细胞的功能是否受损。实验结果发现在1 μM的剂量下，毛细胞的功能以及细胞数目即明显下降；而体内氯离子的含量则是在10 μM的剂量才显著下降；在50 μM 的剂量下则观察到离子细胞氢离子的流出和体内钠离子和钙离子的含量明显减少；而在100 μM的剂量下则出现胚胎体长变短和表皮离子细胞数目减少；剂量达到500 μM时则开始显著影响胚胎的存活率。随着顺铂浓度的增加，胚胎体内的铂累积浓度也随之增加。上述结果显示毛细胞对于顺铂毒性的敏感度高于离子细胞。
Hung GY, Wu CL, Chou YL, Chien CT, Horng JL, Lin LY. Cisplatin exposure impairs ionocytes and hair cells in the skin of zebrafish embryos. Aquat Toxicol. 2019;209:168-177.
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2）科研案例
对斑马鱼幼体皮肤上特定细胞的H+和NH4+外排通量进行了测定。在富含H+泵的细胞中NH4+的外排量相对较高，被认为是斑马鱼分泌H+的离子细胞。幼虫皮肤角质形成细胞和其他类型的离子细胞也有少量NH4+外排。从皮肤中排出的NH4+与酸分泌密切相关。本研究证实了幼虫皮肤上皮细胞的排氨是通过酸捕获机制进行的，这为H+泵和Rh糖蛋白（Rhcg1）参与排氨提供了直接证据
Shih TH, Horng JL, Hwang PP, Lin LY. Ammonia excretion by the skin of zebrafish (Danio rerio) larvae. Am J Physiol Cell Physiol. 2008;295(6):C1625-C1632.
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1）K+生理功能概述
2）科研案例
在斑马鱼的神经丘中未检测到K+流入，结合其他结果，表明在淡水环境中的MET通道传导的是Ca2+而不是K+。因为淡水中的K+含量远低于细胞内K+含量。此外发现，提高外部K+（5 mM）不会干扰Ca2+通过MET通道的进入。因此，神经丘MET通道和内耳MET通道的离子选择性可能不同。
Lin LY, Pang W, Chuang WM, Hung GY, Lin YH, Horng JL. Extracellular Ca(2+) and Mg(2+) modulate aminoglycoside blockade of mechanotransducer channel-mediated Ca(2+) entry in zebrafish hair cells: an in vivo study with the SIET. Am J Physiol Cell Physiol. 2013;305(10):C1060-C1068.
五、可以检测哪些样品
1、动物样品
1）细胞
神经细胞、肿瘤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等
2）组织器官
肿瘤、皮肤、胃粘膜、胰岛、脑（海马体等）、胚胎（大鼠、鱼）、斑马鱼皮肤/鳃、耳蜗、心脏（香螺）、卵（鱼、鸡蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉组织（肌纤维、心肌）
3）其它动物样品
珊瑚、螨虫、昆虫（果蝇幼虫的肠、蟑螂血脑屏障、按蚊、长红锥蝽）、蝌蚪、水蛭、蓝蟹（微感毛）、变形虫、水丝蚓
2、植物样品
1）营养器官
茎：边材、心材、微管形成层、木质部
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮细胞、花粉
种子：整体、胚
果实：果壳、果皮、果肉（苹果、柑橘）、籽粒、棉花纤维、棉桃
3）细胞：植物悬浮细胞、液泡
4）愈伤组织
3、微生物样品
酵母细胞、菌丝、菌落、微藻、细菌（大肠杆菌）
4、其它生物样品
周丛生物
5、非生物样品
金属、混凝土、泥沙、纳米材料、生物医药材料
六、样品需要做哪些前处理
国际领先的非损伤微测技术最大的特点就是活体、无损检测，因此动植物材料在检测前，不需要任何的液氮速冻、染色、研磨处理等。
1、动物单细胞
因NMT是活体检测，故从培养箱中拿出来后，置于培养皿中，直接检测即可。
2、动物组织
因NMT是活体检测，无需提前处理。如检测部位天然暴露在外，如斑马鱼皮肤离子细胞、侧线毛细胞，直接检测即可。如检测部位位于体内，需在检测时暴露出检测部位（可采用麻醉的方式），后检测即可。
3、植物根茎叶等组织器官
天然暴露在外的组织器官，例如根、茎、叶的表面，无需任何处理，直接检测即可。水培、土培、砂培、平板培养均可。
4、植物原生质体/液泡
因NMT是基于微传感器/探针的非损伤检测，检测时不接触样品，故原生质体、液泡需要从组织或者细胞中，提取出来后检测。
5、植物叶片的表皮细胞、叶肉细胞、盐腺细胞、保卫细胞
无需提前处理。因这些细胞处于组织内部，故检测时采用撕取等方式，暴露出相应细胞即可。
6、植物花粉管
离体萌发：在培养皿中萌发一段时间后即可直接检测；在体萌发：将柱头置于培养皿中，待萌发一段时间后即可直接检测。
7、植物果实
无需提前处理。如待测部位位于果实内部，需在检测前暴露出相应部位即可。
8、植物悬浮细胞
无需提前处理。检测时，置于培养皿中检测即可。
七、有哪些检测方式？
即瞬时处理，是指在检测过程中，在正常测试液中瞬间加入所需的干旱胁迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的处理方法，目的是为了观察瞬间干旱胁迫下，样品短时间内的离子/分子的变化趋势，即短时效应。
2、预处理/提前处理好后检测
是指在干旱胁迫一段较长的时间后（数十分钟/数小时/数天），观察植物离子/分子进出的情况，即长时效应。
八、检测环境是空气还是溶液
检测时，只要求待测部位浸于溶液中（无需整体都浸在溶液里）。
九、样品是如何检测的
十、可以送样检测吗
可以送样检测。目前非损伤微测技术测试服务由中关村NMT产业联盟统筹管理，由遍布全国的25家NMT创新平台服务中心，提供检测服务。点击获取测试服务
